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小鼠肺動脈平滑肌細胞永生化細胞專用培養基傳代
點擊次數:128 更新時間:2025-05-15

小鼠肺動脈平滑肌細胞永生化細胞專用培養基傳代 

1) 當細胞匯合度達到 85%以上時,可進行傳代。

2) 在生物安全柜內,打開培養瓶瓶口,收集瓶內的培養基;

3) 向培養瓶內加入 3ml 無菌的 1×PBS 后,水平放置培養瓶,使PBS 能夠浸潤到培養瓶底面上所有的面積,吸棄 PBS;

4) 向瓶內加入消化液 1ml,浸潤底面后放入 37℃ CO2培養箱中孵育 1~2min;

5) 孵育倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起,若全部消化下來則直接向培養瓶內加入2ml 含 10%FBS 的培養基中,將懸液吸入 15ml 離心管;

① 準備一個無菌的 15ml 離心管,加入 2ml 含 10%FBS 的培養基;

② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內中和(避免吹打③);向之前消化的培養瓶中加入 1ml 繼續消化 2min 左右,輕拍培養瓶,95%左右細胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min;

7) 準備兩個新的 T-25 培養瓶,各加入 4ml培養基。

8) 離心完成后,棄上清,用 2ml 培養基重懸離心細胞,將重懸后的細胞轉入 2 個 T-25 培養瓶,每個培養瓶各 1ml;

9) 水平放置培養瓶,震蕩混勻后,將培養瓶置于 37℃,5%CO2培養箱中靜置培養。 


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